1.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和密度:

不要用經(jīng)過(guò)多次轉(zhuǎn)接或儲(chǔ)于4℃的培養(yǎng)菌，最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細(xì)胞的菌液。細(xì)胞生長(zhǎng)密度以剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)為好，可通過(guò)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的OD600來(lái)控制。DH5α菌株的OD600為0.5時(shí),細(xì)胞密度在5×107個(gè)/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時(shí)比較合適。密度過(guò)高或不足均會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度:

用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)DNA(cccDNA)。轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA的量過(guò)多或體積過(guò)大時(shí),轉(zhuǎn)化效率就會(huì)降低。1ng的cccDNA即可使50μl的感受態(tài)細(xì)胞達(dá)到飽和。一般情況下,DNA溶液的體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的5%。細(xì)胞周期,細(xì)胞周期蛋白,檢測(cè)步驟方法,結(jié)果分析,細(xì)胞周期調(diào)控點(diǎn),細(xì)胞周期的調(diào)控機(jī)制,細(xì)周期蛋白激酶,間期分裂期,時(shí)間,細(xì)胞周期試劑盒。

常用的質(zhì)粒載體

載體種類(lèi)：質(zhì)粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

質(zhì)粒特點(diǎn)：
存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀DNA分子。
具有自我復(fù)制功能。
帶有抗性基因及表型識(shí)別等遺傳性標(biāo)記物。
經(jīng)改造后具有多克隆位點(diǎn)。
舉例：pMD-18T質(zhì)粒、pUCl9質(zhì)粒、pBR322質(zhì)粒等